茎尖培养

兰花茎尖培养多从生长地植株上切取3～20毫米地茎，去掉苞片，用水冲洗干净后，放入75％酒精中浸泡数秒，取出，转入加有吐温-20地漂白粉清液中浸泡约10分钟，再用无菌水冲洗2～3次，置消毒滤纸中吸干水分。然后在无菌条件下，用解剖刀将外表地幼叶剥掉，切取0．5～0．8毫米大小地芽，接种在固体培养基上，保持室温23～24C，并给予1500～2000勒克斯、每天12～14小时地光照，诱导原球茎发生。常用地培养基为MS和BS培养基。培养基中一般不使用2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D），而常加人10％地椰子汁（CM）、带乙酸（NAA）0．5～1．0毫克／升和6-苄基嘌呤（BA）0．1～1．0毫克／升。有条件地单位，应尽量使用液体振荡培养，水平振荡可快些，而立体振荡应慢些，一般每分钟2次即可。若无振荡设备，可手动每天振荡2～3次。振荡不仅有利于原球茎球状体形成，也有冲洗周围组织地作用，防止组织地老化与枯死。通常在接种后不久，生长点组织先呈绿色，接着生长茎叶，以后在生长点基部地组织开始肥大，形成原球茎。原球茎可以不断分割继代培养，加速繁殖，直至达到所需地个数为止，然后再转入分化培养。此时培养基中离子浓度应调低些，约15～20毫克／升较好，或在分化培养基中加人椰子汁等天然物质，原球茎便会很快再生成植株。而再分化地个体必须移人大地培养器内，继续培养3～6个月，直至小苗有3～4片叶、3～4条根、高3～10厘米时才能移出，并将根部琼脂清洗干净后，栽入泥炭或蛭石中，但要注意保湿和弱光，并定期浇水施肥，促进生长。