1、培养基配制：猴头菇菌丝在25℃左右生长良好，在南方稍做温控，周年均可生产。常用的培养基配方为：①阔叶木屑78％、麦麸20％；②棉籽壳98％、石膏1％，白糖1％。
配制时，将白糖先溶于水，其他原料拌匀，边拌边加水，糖液也加入，使其含水量达到50％-60％，手捏料时不滴水为宜，培养料配好后即可装袋。
2、装袋：袋可用聚乙烯塑料袋，大小规格17×28×0.05厘米为宜。装料时不要松装，要不断振动、压实，装至距袋口10厘米左右处，用大头粗2厘米，一端尖头圆木棍，棍子上端套上一个口径为3厘米的聚丙烯颈圈，将袋口折回，用橡皮筋扎在颈圈上，用双层牛皮纸包住袋口和棉塞（防止灭菌时受潮）然后进行灭菌。
3、灭菌和接种：聚乙烯袋在常压灭菌6小时到8小时（土蒸锅）冷却后接种，接种时在无菌箱内酒精灯火焰上方。挑取蚕豆大小猴头菌种一块，接到已灭过菌的培养袋内，然后塞好棉塞。
4、培养：接种后将培养袋置在20℃-25℃条件下培养30-40天，菌丝即可长满全袋，形成菌膜。室内湿度保持在80％-90％，可通过地面泼水，空间喷雾来调节湿度，保持室内空气新鲜，有散光射入，10-15天，就可培育出50-100克/袋鲜猴头，可采猴头2-3次，每袋可产猴头100-200克。
