铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo是兰科石斛属多年生附生草本植物,因其茎节处呈黑褐色,又名黑节草,具有益胃生津、滋阴清热、清咽利嗓,提高人体免疫能力、抗肿瘤、抗衰老等功效,主要分布于云南广南、邱北、马关、文山及怒江与恩梅开江的分水岭一带,海拔1600米以下,以及江南各省。多附生在亚热带人迹罕至的深山密林阴湿悬崖峭壁处、树上或长青苔的岩石上。
铁皮石斛的种子极小、无胚乳,自然条件下需与某些真菌共生才能萌发,很难用实生苗栽培;而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低,加上人为的过度采挖和破坏生态环境,其资源已濒临灭绝,因而被国家列为重点保护的药用植物之一,铁皮石斛组织培养快速繁殖被国内外学者广泛关注。铁皮石斛的茎段快繁直接取材于幼嫩茎段,具有取材易、速度快、污染率低、繁殖系数高等优点,可在短期内为生产提供大量栽培用苗,因而能有效保护这一宝贵资源。
1.外植体的消毒
石斛茎段在无菌操作台上用75%的酒精进行表面消毒,去掉灰尘,再用0.1%的升汞灭菌5~8分钟,用无菌水冲洗3次,在此过程中应不断摇晃烧杯,使其充分灭菌。
2.试验过程
将已经灭菌的石斛茎段,在无菌条件下切成至少带有一个茎节的茎段,接种于诱导培养基中诱导出芽,将芽再诱导出原球茎,原球茎再分化,再壮苗,便可将生长健壮的植株移栽。
3.培养基
基本培养基为N6,附加0.75%琼脂,3%白糖,PH值为5.8,培养基进行常规高温高压灭菌,温度为121℃,1.1Mpa,15分钟即可。激素添加如下①诱导茎节发芽:N6+BA2.5毫克/升;②诱导芽形成原球茎:N6+BA2.5毫克/升+I-BA0.5毫克/升;③诱导原球茎分化为植株:N6+BA1.5毫克/升+NAA1.2毫克/升+香蕉汁5%;④生根壮苗培养:N6+NAA2.5毫克/升+土豆汁10%。
或基本培养基为MS,附加0.75%琼脂,3%白糖,pH5.8。(1)芽增殖培养基:MS+NAA0.1~0.5毫克/升+BA0.5~2.0毫克/升;(2)壮苗培养基:MS无激素培养基;(3)生根培养基:1/2MS+IBA0.1毫克/升。
4.培养条件:
温度控制在25±1℃,日光灯照射,每天12小时。
5.移栽
移栽时先将已经长大的石斛种苗取出,用清水洗去根部的培养基,洗净为止,动作要轻,避免损伤其根和叶。然后栽种在以矿质岩:泥炭土为1∶1的基质中。放在遮荫棚里练苗一周,便可正常管理,保持湿度80%,温度不可超过35℃,不接受长时间的阳光直射。